长白山林蛙高效养殖及利用关键技术体系研究与示范

项目名称：长白山林蛙高效养殖及利用关键技术体系研究与示范

项目负责人：张士俊

项目完成人：张士俊 邹建军 崔铁花 勾天兵 高　波 姚旭东 胡长群 王　丽

奖励名称：吉林省科技进步奖

奖励等级：三等

奖励时间：2017年11月

项目简介：

    长白山林蛙（又名东北林蛙Rana dybowskii ）是一种食、药两用的珍贵蛙种，其雌性成蛙的输卵管具有较高的营养药用价值，自古在民间就被誉为与东北三宝齐名的传世滋补佳品。经过几十年的发展，林蛙养殖业已成为东北林区新的经济增长点。现行的“半人工封沟生态养殖技术”虽然能初步满足养蛙生产需要，但是一些影响林蛙养殖经济效益的关键技术一直没有突破性进展，致使养殖业处于低效益水平徘徊。而林蛙油产品服用不方便、保存期短、缺少科学的质量鉴别检测手段也影响了下游产品需求，高附加值产品转化率低，没有对养殖业起到应有的拉动作用。为了提高林蛙养殖效益，开发新型产品，提供科学的质量检测方法，为林蛙产业发展提供技术支撑，由吉林省林业科学研究院等单位承担完成的“长白山林蛙高效养殖及利用关键技术研究与示范”（201204614）项目，经过四年的研究取得了重要成果。

    通过在蝌蚪饲养期影响蝌蚪性别的关键时段采用相应的降温方法控制水温，雌蛙比例可提高25.9%，有效提高了养殖经济效益；通过采用人工放送变态期蝌蚪和人工辅助喂养等措施提高了林地利用率，降低了幼蛙入林阶段的损失，有助于提高林蛙产量；通过病害防治研究，总结出各生产期主要病害的防治措施，通过预防有效降低了病害隐患，避免因病害导致大规模死亡情况的发生；通过林蛙越冬研究，得出了林蛙濒临死亡的水中溶解氧临界值，并提出了水体增氧补救措施，总结出不同越冬方式的越冬管理方法，解决了林蛙如何安全越冬的问题。

    采用真空冷冻干燥技术对冻结参数的设定进行了研究，将原料油进行预冷冻、升华干燥、解析干燥、震荡过筛、成型等工序开发了林蛙油片和林蛙油固体膏两个产品，对产品进行了成分分析和稳定性实验，其营养成分与原料油无明显差别，在低温、避光、阴凉干燥处保存稳定性较好，常温下保存3年，产品蛋白质含量、酸度和过氧化值无明显改变。

    林蛙指纹图谱建立与应用采集13种蛙的样本，使用血细胞基因组提取试剂盒提取样本中所包含的基因组，筛选RAPD引物并进行差异条带分析，引物S131能扩增出长度为1600bp的特异性条带，可以作为长白山林蛙与其他样本的基因靶点进行开发，同时引物S131能作为长白山林蛙与其他样本的鉴别引物使用。通过特定基因测序及序列分析，不同种之间的18S rRNA序列上有差异，可以作为测序后种属鉴定的依据。将筛选得到的差异性条带进行序列测定，确定长白山林蛙鉴别的靶点，建立了基于PCR的林蛙鉴别方法，为林蛙质量标准检测提供了依据。